5-アミノフルオレセイン

5-アミノフルオレセイン (5-AF またはフルオレセインアミンとも呼ばれる) は、蛍光標識試薬として広く使用されています。 5-アミノフルオレセインの第一級アミンは、カルボキシル基（EDC/NHS 活性化を介して）、アルデヒド、ケトン、または活性化エステル（NHS エステルなど）と反応して、安定したアミドまたはイミン結合を形成できます。約 490 nm で励起最大値 (ホウ酸緩衝液 pH 8.5 で λmax = 496 nm)、約 515 nm で発光最大値を示し、良好な光安定性と約 40 nm のストークス シフトを備えた明るい緑色のシグナルを提供します。その蛍光強度は pH に依存し、アルカリ性条件 (pH 8 ～ 9) で顕著に増加します。これは、アミノ基のプロトン化状態の変化に起因すると考えられます。

5-アミノフルオレセインは、タンパク質や抗体の標識から標的薬物送達システムや蛍光センサーの構築に至るまで、生物学および医学研究において幅広く使用されています。 5-アミノフルオレセインは、タンパク質標識用の最も一般的な試薬の 1 つであるフルオレセイン イソチオシアネート (FITC 異性体 I) の合成における重要な中間体でもあります。

製品パラメータ

準備と保管上の注意

5-AFは通常、4-ニトロフタル酸から出発して、還元（例、ヒドラジン/FeOOHを使用）し、メタンスルホン酸中でレゾルシノールと縮合して合成されます。粗生成物は 5-異性体と 6-異性体の混合物であり、結晶化によって分離されます。最新の方法 (マイクロ波支援または酵素) により、収量が向上し、副生成物が削減されます。 HPLC による最終精製により 95% 以上の純度が保証され、構造は NMR および MS によって確認されます。

保管 – この化合物は光、空気、湿気に敏感です。アルゴンパージした密閉容器に入れ、暗所で 4°C で保管します。長期保管 (6 か月以上) の場合は、粉末として -20°C が推奨されます (少なくとも 3 年間は安定です)。 DMSO 中の溶液は、-80°C で 6 か月間、または -20°C で 1 か月間保存できます。凍結融解を繰り返すことは避けてください。光と湿気から保護されていれば、周囲温度での輸送は許容されます。

よくある質問 (FAQ)

Q1: 5-アミノフルオレセイン (5-AF) と FITC の違いは何ですか?どうやって選べばいいのでしょうか？

A: どちらも緑色蛍光染料ですが、反応基が異なります。

● 5‑AF は第一級アミン (-NH₂) を持ちます。結合前にターゲットのカルボキシル基を活性化する必要があります (EDC/NHS を使用)。すでにカルボキシル基を含む分子の標識に最適です。

● FITC には、ターゲット (タンパク質のリジン残基など) 上のアミンと直接反応するイソチオシアネート基 (-N=C=S) があり、事前の活性化は必要ありません。日常的なタンパク質標識には FITC の方が便利です。

● 特定の指向性共役 (例: カルボキシル ハンドル経由) が必要な場合、またはカスタムの蛍光誘導体の合成を計画している場合は、5‑AF を選択します。一般に、抗体を直接標識する場合は、FITC の方が簡単です。

Q2: 5‑AF で生体分子を標識するための一般的な反応条件は何ですか?

A: 最も一般的な方法はアミドカップリングです。EDC および NHS (MES または PBS バッファー、pH 5.5 ～ 6.5) で標的分子のカルボキシル基を活性化し、その後 5-AF を加えて pH 7.5 ～ 8.5 に調整します。室温または 37°C で 2 ～ 4 時間インキュベートします。アルデヒドを含むターゲット (糖タンパク質など) の場合は、シアノ水素化ホウ素ナトリウムによる還元的アミノ化を使用します。未反応の染料は、脱塩または透析によって除去できます。染料とタンパク質のモル比は 5:1 ～ 20:1 から始めるのが良いでしょう。

なぜコスパーファームなのか？ – 当社の競争上の優位性

お問い合わせ

パイロット実験用の少量のサンプルが必要な場合でも、商業生産用の大量のサンプルが必要な場合でも、Cosperpharm はお客様をサポ​​ートする準備ができています。 5-アミノフルオレセインに関するお客様の要件について今すぐお問い合わせください。お客様のプロジェクトを前進させるために私たちがどのようにお手伝いできるか見てみましょう。