2'-O-メチル-rA(N-Bz)ホスホロアミダイト

2'-O-メチル-rA(N-Bz) ホスホラミダイトは、オリゴヌクレオチド合成に使用できる修飾ホスホルアミダイト モノマーです。 2'-O-メチル修飾は、RNA/RNA二本鎖の水素結合特性をDNA/RNAハイブリッドよりも忠実に保存しながら、オリゴヌクレオチドにかなりのヌクレアーゼ耐性を与えます。 RNA 干渉 (RNAi) アプリケーションでは、2'-O-メチル-rA(N-Bz) ホスホロアミダイトが低分子干渉 RNA (siRNA) 二本鎖のセンス鎖とアンチセンス鎖に頻繁に組み込まれ、RNAi 活性を損なうことなく血清安定性を高め、オフターゲット効果を低減します。 2'-O-メチル-rA(N-Bz) ホスホロアミダイトは、部位特異的な 2'-O-メチルアデノシン修飾を含む RNA オリゴヌクレオチドの化学合成における重要な構成要素としても機能します。保護基 (5' に DMT、N6 に Bz、3' に CE ホスホラミダイト) により、高い忠実度で RNA 鎖を段階的に組み立てることができ、自動 DNA/RNA 合成装置で制御できます。 RNA 治療薬を超えて、2'-O-メチル-rA(N-Bz) ホスホラミダイトは、異常な RNA 構造を研究するためのリン酸分岐 RNA モデルの合成や、熱安定化蛍光オリゴヌクレオチド プローブの調製に用途が見出されています。

製品パラメータ

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製品の利点

1. ヌクレアーゼ耐性と熱安定性のための 2'-O-メチル修飾

リボース 2' 位の 2'-O-メチル修飾は、オリゴヌクレオチド治療薬において最も広範囲に検証されている化学修飾の 1 つです。 2'-O-メチル-rA(N-Bz) ホスホロアミダイトを組み込んだオリゴヌクレオチドは、未修飾の RNA と比較して、エンドヌクレアーゼおよびエキソヌクレアーゼに対する耐性が著しく向上し、ワトソン・クリック塩基対形成の特異性を損なうことなく RNA/RNA 二重鎖の熱安定性が向上 (Tm の増加) します。この修飾は、FDA 承認のオリゴヌクレオチド医薬品および多数の臨床段階の候補品に導入され、成功しています。

2. 高忠実度合成のための N6-ベンゾイル保護

アデニン塩基の N6 環外アミン上のベンゾイル (Bz) 保護基は、脱プリンやアシル化によって引き起こされる分岐や鎖停止イベントなど、ホスホルアミダイト カップリング サイクル中の望ましくない副反応を防ぎます。 Bz 基は標準的なオリゴヌクレオチド脱保護条件 (濃アンモニア、55°C、8 ～ 16 時間、または AMA) できれいに除去され、副産物が検出されずに天然のアデニン塩基が得られます。

3. C3'-Endo 糖立体構造の事前組織化

2'-O-メチル置換により、リボース糖が C3'-エンド (ノース) 構造に固定されます。これは、A 型二本鎖の RNA が採用するものと同じ構造です。この立体構造の事前組織化により、相補的 RNA 標的へのハイブリダイゼーション時のエントロピーペナルティが減少し、その結果、同じ配列の DNA または未修飾 RNA と比較して、2'-O-メチル修飾オリゴヌクレオチドに対する結合親和性 (より高い Tm) が得られます。

4. 自動合成のための標準保護基互換性

2'-O-メチル-rA(N-Bz) ホスホラミダイトは、標準的な RNA ホスホラミダイトで使用されるものと同じ 5'-O-DMT および N6-Bz 保護基を持ち、さらに 3' 位に β-シアノエチル (CE) ホスホラミダイトを持ちます。この設計により、特殊な脱保護プロトコルやカップリング条件の変更を必要とせずに、既存の自動 DNA/RNA 合成装置ワークフローへのシームレスな統合が保証されます。

5. オリゴヌクレオチドプラットフォームにわたる幅広い治療用途

2'-O-メチル-rA(N-Bz) ホスホロアミダイトは、siRNA (センス鎖およびアンチセンス鎖修飾)、遺伝子サイレンシング用のアンチセンス オリゴヌクレオチド (ASO)、標的送達および診断用途用のアプタマー、分子診断用の修飾 RNA プローブなど、複数のオリゴヌクレオチド治療プラットフォームで使用されています。 2'-O-メチル修飾は、安定性と編集効率を高めるために CRISPR-Cas ガイド RNA にも広く利用されています。

アプリケーションシナリオ

1. siRNA 治療薬の開発

2’-O-メチル-rA(N-Bz) ホスホロアミダイトは、低分子干渉 RNA (siRNA) 二重鎖のセンス鎖および/またはアンチセンス鎖に 2’-O-メチルアデノシン修飾を導入するために使用され、血清安定性を高め、RNAi 機構によって媒介されるオフターゲット効果 (例: パッセンジャー鎖ローディング) を低減し、免疫刺激 (TLR7/8 活性化) を減少させます。 2'-O-メチル修飾は、多くの臨床的に先進的な siRNA プラットフォームの標準コンポーネントです。

2. アンチセンスオリゴヌクレオチド（ASO）の製造

2'-O-メチル-rA(N-Bz) ホスホロアミダイトは、遺伝子サイレンシング用途のアンチセンス オリゴヌクレオチドに広く組み込まれています。 2'-O-メチル修飾は、体液中の ASO に対するヌクレアーゼ耐性を付与し、RNase H 媒介の切断機構を阻害することなく、相補的 RNA 標的への結合親和性を高めます (2'-O-メチル/2'-デオキシ ギャップマー設計に配置した場合)。

3. RNA オリゴヌクレオチドの化学合成

2'-O-メチル-rA(N-Bz) ホスホロアミダイトは、部位特異的な 2'-O-メチルアデノシン残基を含む RNA オリゴヌクレオチドの固相化学合成の構成要素として機能します。保護基 (5'-O-DMT、N6-Bz、CE ホスホルアミダイト) は、標準的な RNA 合成サイクルおよび脱保護条件 (NH3、55°C、8 ～ 16 時間、または AMA) と互換性があり、確立された合成ワークフローへのシームレスな統合を可能にします。

4. 蛍光オリゴヌクレオチドプローブの設計

2'-O-メチル修飾により、リアルタイム PCR や in situ ハイブリダイゼーションで使用される蛍光プローブ (モレキュラー ビーコン、TaqMan プローブなど) の熱安定性が向上します。 2'-O-メチル-rA(N-Bz) ホスホロアミダイトにより、プローブ配列への安定化修飾の導入が可能になり、シグナル対ノイズ比が増加し、低存在量の RNA ターゲットのより堅牢な検出が可能になります。

5. アプタマー開発 化学修飾を施したアプタマーを組み込む

2'-O-メチル ヌクレオチドは、未修飾の RNA アプタマーと比較して、ヌクレアーゼ耐性が向上し、生体内半減期が延長され、標的結合親和性が向上します。 2'-O-メチル-rA(N-Bz) ホスホロアミダイトは、固相合成により 2'-O-メチル修飾アプタマー ライブラリを生成するための重要な構成要素です。

6. CRISPR‑Cas ガイド RNA (gRNA) の修飾

CRISPR‑Cas gRNA の特定の位置に配置された 2'-O-メチル修飾は、細胞内および生体内での安定性を高め、免疫原性を低下させ、編集効率を向上させることができます。 2'-O-メチル-rA(N-Bz) ホスホロアミダイトは、化学合成された gRNA への 2'-O-メチルアデノシン残基の部位特異的導入を可能にします。

7. リン酸分岐 RNA 研究

リン酸分岐 RNA などの珍しい RNA 構造を研究する研究者は、生理的条件下での分岐ホスホトリエステル結合の加水分解安定性を調査するために、2'-O-メチル-rA(N-Bz) ホスホロアミダイトを利用して単一の遊離 2'-OH 基を含むモデル オリゴヌクレオチドを調製します。

8. 修飾オリゴヌクレオチドの熱安定性研究

2'-O-メチル-rA(N-Bz) ホスホロアミダイトは、二本鎖の融解温度およびハイブリダイゼーション熱力学に対する 2'-O-メチル修飾の位置的影響の特性評価を含む、修飾オリゴヌクレオチド二本鎖の熱安定性 (Tm) の体系的な研究に使用されます。

9. 固相オリゴヌクレオチド合成

プロセス開発 プロセス化学者とオリゴヌクレオチド合成の専門家は、2'-O-メチル-rA(N-Bz) ホスホロアミダイトを使用して、2'-O-メチル修飾核酸治療薬の大規模製造のためのカップリング条件、脱保護プロトコル、および精製方法を最適化します。 Cosperpharm は、プロセスの検証とスケールアップ活動をサポートするバッチ固有の分析データを提供します。

10. オリゴヌクレオチドの品質管理のための分析法の開発

2'-O-メチル-rA(N-Bz) ホスホロアミダイトは、オリゴヌクレオチド原薬および医薬品中の修飾ヌクレオシド含有量を定量するため、また合成関連の不純物 (不完全な DMT 除去、脱プリン生成物、亜リン酸酸化副産物など) を同定するための HPLC および LC-MS 法の開発における参照標準として使用されます。

お問い合わせ

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