チルゼパチドは、GIP (胃抑制ペプチド) と GLP-1 (グルカゴン様ペプチド-1) の両方を標的とする新規二重受容体アゴニストであり、イーライリリーによって開発され、糖尿病、非アルコール性脂肪性肝炎 (NASH)、慢性体重管理の標的治療向けに販売され、半減期は 116.7 時間で成功しました。 2022年に糖尿病治療薬として承認されたのに続き、2023年11月には米国でさらに減量薬として承認された。大規模臨床試験では、この薬で治療を受けた患者は最大21％の体重減少を達成したと報告された。この分子は、39 アミノ酸からなるペプチド主鎖と残基 Lys20 の側鎖で構成されています。これら 39 個のアミノ酸のうち、37 個は天然に存在する (またはコードされている) のですが、2 個は非天然型です: 2 位と 13 位の非コード アミノイソ酪酸残基。
二重活性を達成するために、ティルゼパチドは、GLP-1 および GIP に由来するアミノ酸残基を組み込むだけでなく、いくつかの固有のアミノ酸残基も利用します。そのペプチド構造は主に GLP-1、GIP、エクセナチド、およびセマグルチドに由来しており、いくつかの残基が特徴的です。
ティルゼパチドの合成プロセスに関する研究では、合成ペプチドを製造するために多くの方法が使用されてきました。適切な合成法の選択は、通常、非コードアミノ酸、非ペプチド側鎖の存在、関与するアミノ酸の数などの分子特性に基づいて行われます。
Bイオシンセシス：巨大分子（モノクローナル抗体など）に一般的に使用される組換え技術は、より小さなペプチドにも適用できます。このアプローチでは、外部 DNA が大腸菌または哺乳動物 (チャイナハムスター卵巣、CHO) 細胞株に導入され、そこでペプチドが細胞によって合成されます。通常、開発スケジュールは従来の合成方法よりも長くなりますが、このアプローチは半合成ペプチド (セマグルチド、インスリン デグルデク、リラグルチドなど) に使用されて成功しています。この方法の 2 つの欠点は次のとおりです。(1) DNA 配列によってコードされていないアミノ酸を導入するのが難しいこと。 (2) 非ペプチド側鎖を組み込むための組換え後の合成修飾の必要性。
CヘミカルS合成：
固相ペプチド合成 (SPPS) は、多くの中サイズのペプチド (例:LイサナプチドとEゼナチド）、非コードアミノ酸を使用して合成されたものを含む。残念なことに、より大きなペプチド（通常は 30 アミノ酸を超える）の場合、SPPS はプロセス収率が低く、純度が低いことがよくあります。さらに、多数の連続した単位操作をエラーなく実行する必要があるため (30 アミノ酸を超えるペプチドの失敗率は 20% と推定されます)、これには重大な生産リスクが伴います。
液相ペプチド合成 (LPPS)。この方法は、成長するペプチドが樹脂に結合せず、その C 末端が非反応性のアミドまたは保護されたエステルであることを除いて、SPPS に似ています。より小さなペプチドの合成に適しています (≤10 アミノ酸）ですが、ペプチドの長さが増加するにつれて収量と純度は急速に低下します。
SPPS/LPPSハイブリッド方式。このアプローチでは、SPPS を利用して高純度の短いペプチドフラグメントと十分に特徴付けられた沈殿中間体を生成するため、長い SPPS 構築物に固有の多くの製造リスクと純度の問題が回避されます。続いて、保護されたフラグメントが液相で結合されます。
SPPS/LPPS ハイブリッド方式は、両方の技術の利点を組み合わせた優れたアプローチです。このハイブリッド戦略を実装するには、LPPS を介して合成された適切なフラグメントを最初に選択する必要があります。フラグメント選択における主な考慮事項には、ペプチドの長さ、フラグメントの総数、切断部位のアミノ酸同一性、および側鎖の特性が含まれます。フラグメントのサイズと量は重要です。より小さなフラグメントは高純度を達成できますが、追加の LPPS ステップを含むより複雑な製造プロセスが必要になります。逆に、大きなフラグメントが少ないと、製造上の課題が大きくなり、高純度を達成する際のリスクが高くなります。これらの要因を評価した後、イーライリリーの研究者はチリトロピン合成用に 4 つのフラグメントを選択しました。切断部位に関しては、アミド骨格がアミノ酸のジアステレオマー化を促進するため、各フラグメントの C 末端アミノ酸のジアステレオマー化が極めて重要な考慮事項でした。αSPPS構築物で使用されるFmoc保護アミノ酸と比較して、-立体中心がより容易に認識されます。さまざまなフラグメントを広範に評価した結果、最終的に 4 つの特定のフラグメントが選択されました (図 2)–5)。 4 つのフラグメントはすべて SPPS を介して合成されており、固体生成物として容易に分離でき、非常に高い純度レベル (97.5) を達成しています。–99.5%）。
次にフラグメント2–図 5 に示すデバイスは、4 段階の LPPS プロセスを通じて結合されます。
ステップ 1: アミノ酸 30 を表す最初の 2 つのフラグメント 2 と 3 を接続します。–39と22–それぞれ29。フラグメント 2 と 3 のジメチルスルホキシド (DMSO) とアセトニトリル (ACN) 溶液、および PyOxim と純粋なジイソプロピルエチルアミンの ACN 溶液を別々に調製し、プラグ フロー リアクター (PFR) 27 に入る前に一緒に流し、均一性を確保するオンライン混合を行います。；
ステップ 2: 得られたアミノ酸 22–次に、39 (化合物 6) をフラグメント 4 と結合させてアミノ酸 15 を生成しました。–39 (化合物 7)；
ステップ3: 得られたアミノ酸配列15–39 (化合物 7) をフラグメント 5 とカップリングして、Boc 保護チルドロペプチドを生成しました。；
ステップ 4: 保護コーティングを除去してティルゼパチドを入手します.
ナノ濾過は、分子量と疎水性に基づいて溶液中の溶解物質を分離する膜ベースの技術です。粗反応溶液は膜を通過し、目的のペプチドを保持したまま、ジベンゾフレン (DBF)、ジエチルアミン (DEA)、PyOxim 関連副産物 (PyO) などの低分子量不純物を除去します。適切な細孔サイズを選択することが重要であり、低流束 (過度に小さい細孔の場合) とペプチド損失 (過度に大きい細孔の場合) の間のバランスが必要です。この技術により、大幅に簡素化された操作手順で大規模な生産が可能になります。
ティルゼパチドは純粋に化学合成されているため、その医薬品有効成分 (API) を製造するメーカーが多数あり、激しい競争が生じています。現在、 チルゼパチドは、Hequan Pharmaceutical によって国内で製造され、製剤調製のために海外に輸出されています。
参考文献：組織プロセス解像度開発者2021年25月1628日−1636
お問い合わせ：
必要ティルゼパチドペプチド API 開発、参照標準認定、またはバイオシミラー プログラムに最適ですか? Cosperpharm は高い品質を提供します‑純合成または組換えティルゼパチド 完全な HPLC、MS、アミノ酸分析に加え、安定性と規制に関する文書も含まれています。研究開発用のミリグラムから商用キログラムまで、柔軟な供給、透明性のある価格設定、合成と不純物管理の技術サポートを提供します。弊社ウェブサイトまたは電子メールでお問い合わせください– カスタマイズされた見積もりと現実的なリードタイムを 24 時間以内に返信します。 Cosperpharm は、研究室から市場までテリパラチド プロジェクトをサポートします。
電話: +86-18986204913
電話番号: +86-027-83338163
電子メール: info@cosperpharma.com
-
