カグリリンチドの調製方法

背景技術

カグリリンチドは、新規の長時間作用型アシル化アミリン類似体です。アミリン受容体 (AMYR) およびカルシトニン G タンパク質共役受容体 (CTR) の非選択的アゴニストとして、38 個のアミノ酸から構成される環状ポリペプチドです。その配列には 38 個のアミノ酸と 1 対のジスルフィド結合が含まれています。カグリリンチドは体重と食物摂取量を大幅に減らすことができ、肥満研究における可能性を秘めています。アミリンは、GLP-1 シグナル伝達経路外の空腹感と満腹感に関連するもう 1 つのホルモンです。

 

カグリリンチドは、エネルギー摂取量を減らし、食品の選択と好みを調節し、インスリンと同時分泌されることでグルコース調節効果を発揮し、食後のグルカゴン放出を阻害し、胃内容排出を遅らせることができます。糖尿病、肥満、メタボリックシンドローム、心血管疾患などの治療に明らかな利点があり、幅広い需要と応用の見通しを持っています。

カグリリンチドの化学構造式

 

 

基本情報

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中国語名：卡格列肽

英語N雨：カグリリンチド

会社番号：GT-F064

CAS：1415456-99-3

Sシーケンス：γ-Glu-Lys-Cys-Asn-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Glu-Phe-Leu-Arg-His-Ser-Ser-Asn-As n-Phe-Gly-Pro-Ile-Leu-Pro-Pro-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Asn-Thr-Pro-NH2(ジスルフィド架橋:cys4-cys9)

M眼球F数式：C₁₉₄H₃₁₂N₅₄O₅₉S₂

M眼球重さ：4409.01

 

使用される原材料カグリリンチド

 

合成ルート

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カグリリンチドの関連特許によれば、カグリリンチドの合成方法が得られる。カグリリンチド配列の7〜8位のアミノ酸は擬似プロリンジペプチドFmoc-Ala-Thr(pro-me-me)-OHとして選択され、配列の10〜11位のアミノ酸は擬似プロリンジペプチドFmoc-Ala-Thr(pro-me-me)-OHとして選択され、配列の21〜22位のアミノ酸は擬似プロリンとして選択される。ジペプチド Fmoc-Ser-Ser(pro-me-me)-OH;カップリング反応はアミノ酸配列に従って残りの位置で行われます。ペプチド樹脂が切断されて直鎖状のカリリンチドが得られます。次いで、液相環化により粗製カグリリンチドが得られ、精製調製、塩移動、濃縮、および凍結乾燥により精製されたカグリリンチドが得られる。この方法では、カップリングに 3 つの擬似プロリン ジペプチドを使用します。樹脂重縮合によるカップリング難易度の上昇という問題は解決されますが、製造コストが増加し、この方法で得られる精製ペプチドの純度は比較的低く、医薬品原薬の品質要件を満たしていません。

カグリリンチドの調製図

 

(1)の準備カグリリンチドペプチド樹脂

最初の保護アミノ酸 1.5 mmol と HOBT 1.5 mmol を取り、適量の DMF で溶解し、0 ～ 15 °C に冷却します。さらに 1.5 mmol の DIC を取り、撹拌しながら保護アミノ酸の DMF 溶液にゆっくりと加え、反応液を 0 ～ 15℃で 10 分間撹拌して活性化された保護アミノ酸溶液を得ます。これを保管します。

 

アミノ樹脂０．５ｍｍｏｌ（置換度０．４２ｍｍｏｌ／ｇ）をとり、ＤＭＦ溶液で６０分間膨潤させ、２０％Ｐｉｐ／ＤＭＦ溶液で３０分間脱保護し、洗浄、濾過して反応させる樹脂を得る。

 

活性化した第一保護アミノ酸溶液を反応させる樹脂に添加し、25~35℃で120~300分間カップリング反応を行い、濾過、洗浄して1個の保護アミノ酸を含む樹脂: Fmoc-Pro-Resinを得る

 

上記と同じ方法を使用して、上記の対応する 2 番目から 38 番目の保護されたアミノ酸またはフラグメントに順次アクセスします。:Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Val-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Pro-OH・H2O，Fmoc-Pro-OH・H2O，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-イル-オハイオ州，Fmoc-Pro-OH・H2O，Fmoc-Phe-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Pro-OH・H2O，Fmoc-Glu(OtBu)-OH，Fmoc-Ala-OH・H2O，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，Fmoc-Gln(Trt)-OH，Fmoc-Ala-Thr(psi(Me,Me)pro)-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Ala-Thr(psi(Me,Me)pro)-OH，Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Glu-OtBu，エイコサン二酸モノ-tert-ブチル、4.98 g のカルメグリプチン ペプチド樹脂を生成

 

(2)原油の調製カグリリンチド 直鎖状ペプチド

カーフィルゾミブペプチド樹脂 4.49 g を取り、TFA 混合溶液を加えます。混合溶液の比率は TFA:EDT/Tis/フェノール/H2O = 87.5:2.5:5:2.5:2.5、投与量は樹脂 1 グラムあたり 8 ml です。反応物を２０〜３０℃で３時間撹拌し、反応混合物を砂中子漏斗で濾過し、濾液を回収し、樹脂を少量のＴＦＡで３回洗浄し、濾液を合わせ、ＭＴＢＥを加えて沈殿させ、沈殿物をＭＴＢＥで３回洗浄し、ポンプ乾燥してオフホワイトの粉末を得た。これは２．０８ｇの粗直鎖状カーフィルゾミブペプチドである。

 

(3)粗カグリリンチド環状ペプチド溶液の調製

粗製リニア 0.50 g を採取します。Cアグリリンチドペプチドを調製し、濃度5.0 mg/mlの粗直鎖状ペプチド溶液を調製し、撹拌しながら5mlのDMSO溶液を滴下し、20~30℃で20時間反応させ、粗環状カグリリンチドペプチド溶液を得る。

 

(4)精製物の調製Cアグリリンチドペプチド

原油を取りますCアラグリチド環状ペプチド溶液を添加し、0.45μmの混合微多孔性フィルター膜でろ過します。；

 

高速液体クロマトグラフィーを使用して精製および調製し、Cアラググリプチン画分；

 

緩衝液交換には高速液体クロマトグラフィーを使用した。緩衝液交換後の主要なピークを収集し、その純度を分析用液体クロマトグラフィーによって検出した。緩衝液交換後のメインピーク溶液を合わせ、減圧濃縮してカルボチドの酢酸水溶液を得、これを凍結乾燥して、純度９９．５８％、最大単一不純物０．０９％、総収率３１．８７％、分子量４４０９．０の精製カルボチド１５２．１８ｍｇを得た。

 

HPLC 図

 

MSダイアグラム

 

上記の例は、ステップバイステップのカップリング合成プロセスと比較して、本発明によって提供される方法によって得られる生成物の純度が99.0%を超え、単一の不純物が0.1%未満であり、これにより生成物の品質と総収率が向上することを示している。このプロセスはシンプルで制御が容易で、工業化度が高く、広範な実用的価値と応用の可能性を秘めています。

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